Kit de test rapide de sécurité alimentaire basé sur la technologie PCR en temps réel lyophilisée pour la détection de Salmonella dans la surveillance de la sécurité alimentaire

 Kit de détection PCR en temps réel LyoDt® pour Salmonella en poudre lyophilisée

1. INTRODUCTION

Salmonella est une entérobactérie Gram-négatif et un agent pathogène courant d'origine alimentaire. Ces bactéries sont largement distribuées dans la nature et colonisent fréquemment les intestins des humains et des animaux, en particulier la volaille, le bétail et les animaux de compagnie. Les principaux vecteurs alimentaires de la contamination par Salmonella comprennent : la viande et les produits carnés, les œufs et les produits à base d'œufs, le lait et les produits laitiers, etc.

Ce produit est un réactif PCR en temps réel lyophilisé pour la détection de Salmonella. Il utilise le gène invA hautement conservé de Salmonella comme cible de détection. Il s'agit d'un mastermix contenant tous les ingrédients nécessaires, à l'exception de l'ADN matrice, et il est pré-distribué en test unique dans des tubes PCR pour une utilisation facile. Ce produit ne nécessite pas de chaîne du froid pour le transport et le stockage, ce qui réduit considérablement les coûts d'expédition et élimine les pertes possibles dues au gaspillage de réactifs et à la contamination par aérosols.

2. SPÉCIFICATIONS ET COMPOSITION

3. STOCKAGE ET DURÉE DE CONSERVATION

Conserver à température ambiante (5-30°C). Il est stable jusqu'à 12 mois. Une fois l'emballage sous vide ouvert, veuillez conserver les produits non utilisés dans le sachet plastique refermable fourni avec les dessiccateurs et dans le sachet en feuille d'aluminium.

ATTENTION :

La diminution de la taille du granulé de réactif est une indication de l'infiltration d'humidité dans le tube et le réactif est humidifié. Tout réactif dont la taille du granulé est significativement plus petite que d'habitude doit être jeté ou testé avec un contrôle positif avant utilisation pour le test d'échantillon.

4. ÉQUIPEMENTS ET RÉACTIFS SUPPLÉMENTAIRES REQUIS

1) Appareil PCR en temps réel

2) Pipettes et pointes

3) Eau sans nucléase

4) Kit d'extraction d'acides nucléiques

5. SYSTÈMES PCR EN TEMPS RÉEL COMPATIBLES

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. ÉCHANTILLONS ACCEPTABLES

Bouillon d'enrichissement alimentaire, vomissures, échantillons diarrhéiques, etc.

7. PROCÉDURE OPÉRATOIRE

1) Extraction d'acides nucléiques

     Extraire l'ADN des échantillons à l'aide d'un kit d'extraction approprié. Il est recommandé que l'ADN soit élué avec environ 100μl de tampon d'élution  (TE ou H sans nucléase₂O) dans l'étape finale de l'extraction. L'acide nucléique purifié doit être utilisé immédiatement ou conservé à -20°C.

2) Préparation du contrôle positif

Le contrôle positif peut être conservé à température ambiante avant la réhydratation pendant 12 mois maximum. Il doit être réhydraté avant utilisation en ajoutant 250 μl de tampon TE ou de H sans nucléase₂O, vortexé à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes et centrifugé à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes. Utiliser immédiatement ou conserver à -20°C.

3) Préparation du mélange PCR en temps réel

A) Ouvrez l'emballage sous vide et sortez les barrettes de 8 tubes contenant le réactif. Vérifiez que le granulé est au fond du tube (coupez le nombre de tubes nécessaires si nécessaire). Si les tubes fournis ne sont pas compatibles avec votre instrument, transférez le granulé de réactif dans un tube optique compatible avec votre instrument.

B) Ouvrez les tubes et jetez le(s) bouchon(s) (ne convient pas aux machines PCR en temps réel), et préparez le mélange réactionnel sur de la glace comme ci-dessous.

* De l'eau sans nucléase peut être utilisée comme contrôle négatif.

C) Boucher les PCR à l'aide de bouchons (barrettes) adaptés à la PCR en temps réel (non fournis).

D) Vortexer les tubes à basse vitesse pendant 10 à 15 secondes et centrifuger à 3000 tr/min pendant 20 secondes et les placer dans un appareil PCR en temps réel.

2) Configuration de la RT-PCR

Réglez le volume de réaction sur 25μl et la procédure d'amplification PCR comme ci-dessous. Recueillir la fluorescence FAM à 60°C et sélectionner AUCUN comme référence passive.

3) Analyse et interprétation des résultats