LyoDt® réactif de détection PCR en temps réel pour Cronobacter poudre lyophilisée

LyoDt® réactif de détection PCR en temps réel pour Cronobacter poudre lyophilisée

1.Le projet de loi

Cronobacterest un genre de bactéries nouvellement défini, dont le prédécesseur estL'entérobactère sakazakii. Cronobacterest un pathogène grave transmis par les aliments, principalement transmis par le biais de préparations pour nourrissons contaminées, provoquant une méningite néonatale, une septicémie et une entérocolite nécrosante.

Ce produit est un réactif de PCR en temps réel lyophilisé pour la détection deCronobacterIl utilise le gène ompA très conservé deCronobacterIl s'agit d'un mastermix contenant tous les ingrédients nécessaires, à l'exception de l'ADN modèle, et il est pré-distribué sous forme de test unique dans des tubes PCR pour une utilisation facile.Ce produit ne nécessite pas de chaîne de froid pour le transport et le stockage, ce qui réduit considérablement les coûts d'expédition et élimine les éventuelles pertes dues au gaspillage de réactifs et à la contamination par aérosol.

2. Spécifications et composition

3. stockage Et la durée de conservation

Conserver à température ambiante (5-30°C). Il est stable jusqu'à 12 mois. Une fois l'emballage sous vide ouvert, veuillez ranger les produits non utilisés dans le sac en plastique recouvre-boucle fourni avec les déshydrants.et dans le sac en feuille d'aluminium.

Attention:

La diminution de la taille de la pellette de réactif indique que l'humidité s'infiltre dans le tube et que le réactif est humidifié.Tous les réactifs dont la taille des granulés est nettement inférieure à la normale doivent être éliminés ou soumis à un test de contrôle positif avant utilisation.pour les essais par échantillonnage.

4. ÉQUIPEMENTES et réactifs supplémentaires requis

1) Instruments de PCR en temps réel

2) Pipettes et pointeurs

3) Eau sans nucléase

4) Kit d'extraction d'acide nucléique

5. Systèmes PCR compatibles en temps réel

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600 ont été utilisés pour le traitement de l'eau.

6. échantillons acceptables

Bouillon d'enrichissement alimentaire, vomissements, échantillons de diarrhée, etc.

7. PROCEDURE de l' opération

1) Extraction par acide nucléique

Extraire l'ADN des échantillons avec un kit d'extraction approprié.Il est recommandé que leL' ADNest élué avec environ 100 μl de tampon d'élution(TEouH sans nucléase₂O) dans la dernière étape deextraction.L' acide nucléique purifié doit être utilisé immédiatement ou conservé à -20°C.

2) Préparation du contrôle positif

Le témoin positif peut être conservé à température ambiante avant réhydratation pendant 12 mois maximum.₂O, tourbillonnés à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes et centrifugés à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes.

3) Préparation du mélange PCR en temps réel

A) Ouvrez l'emballage sous vide et retirez les bandes de 8 tubes contenant le réactif.Si les tubes fournis ne sont pas compatibles avec votre instrument, transférer la pelle de réactif dans un tube optique compatible avec votre instrument.

B) Ouvrez les tubes et jetez le capuchon (non adapté aux machines de PCR en temps réel) et préparez le mélange de réaction sur glace comme ci-dessous.

étape deextraction.L' acide nucléique purifié doit être utilisé immédiatement ou conservé à -20°C.

2) Préparation du contrôle positif

Le témoin positif peut être conservé à température ambiante avant réhydratation pendant 12 mois maximum.₂O, tourbillonnés à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes et centrifugés à basse vitesse pendant 15 à 20 secondes.

3) Préparation du mélange PCR en temps réel

A) Ouvrez l'emballage sous vide et retirez les bandes de 8 tubes contenant le réactif.Si les tubes fournis ne sont pas compatibles avec votre instrument, transférer la pelle de réactif dans un tube optique compatible avec votre instrument.

B) Ouvrez les tubes et jetez le capuchon (non adapté aux machines de PCR en temps réel) et préparez le mélange de réaction sur glace comme ci-dessous.

* L'eau sans nucléase peut être utilisée comme témoin négatif.

• Le PCR doit être recouvert d'un capuchon (bandes) adapté à la PCR en temps réel (non fourni).

D) Faire tourner les tubes à basse vitesse pendant 10 à 15 secondes, centrifuger à 3000 tr/min pendant 20 secondes et les placer dans un instrument de PCR en temps réel.

2) Réglage RT-PCR

Réglez le volume de réaction à 25 μl et la procédure d'amplification par PCR comme indiqué ci-dessous.

3) Analyse et interprétation des résultats